鄭州寶晶電子科技有限公司簡述關(guān)于抗生素效價測定儀的測量方法和步驟

  抗生素的效價常采用微生物學(xué)方法測定，它是利用抗生素對特定的微生物具有抗菌活性的原理來測定抗生素效價的方法，如管碟法（cylinder plate method）。管碟法是根據(jù)抗生素在瓊脂平板培養(yǎng)基中的擴(kuò)散滲透作用，比較標(biāo)準(zhǔn)品和檢品兩者對試驗(yàn)菌的抑菌圈大小來測定供試品的效價。

    管碟法的基本原理是在含有高度敏感性試驗(yàn)菌的瓊脂平板上放置小鋼管（內(nèi)徑6.0±0.lmm，外徑8.0±0.lmm，高10±0.lmm），管內(nèi)放入標(biāo)準(zhǔn)品和檢品的溶液，經(jīng)16~18小時恒溫培養(yǎng)，抗生素擴(kuò)散的有效范圍內(nèi)則產(chǎn)生透明的無菌生長的區(qū)域，常呈圓形，稱為抑菌圈（圖實(shí)驗(yàn)-18）。抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關(guān)，比較抗生素標(biāo)準(zhǔn)品與檢品的抑菌圈大小，可計算出抗生素的效價�？股匦r常采用二劑量法。將抗生素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品各稀釋成一定濃度比例（2:1或4:1）的兩種溶液，在同一平板上比較其抗藥活性，再根據(jù)抗生素濃度對數(shù)和抑菌圈直徑成直線關(guān)系的原理來計算供試品效價。取含菌層的雙層平板培養(yǎng)基，每個平板表面放置4個小鋼管，管內(nèi)分別放入檢品高、低劑量和標(biāo)準(zhǔn)品高、低劑量溶液。先測量出四點(diǎn)的抑菌圈直徑，按下列公式計算出檢品的效價。

(1) 求出W和V：

(2) W=（SH+UH）-（SL+UL）

(3) V=（UH+UL）-（SH+SL）

式中： UH：供試品高劑量之抑菌圈直徑

UL：供試品低劑量之抑菌圈直徑

SH：標(biāo)準(zhǔn)品高劑量之抑菌圈直徑

SL：標(biāo)準(zhǔn)品低劑量之抑菌圈直徑

求出θ：（2） θ=D·antilog（IV/W）式中：

θ：供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的效價比

D：標(biāo)準(zhǔn)品高劑量與供試品高劑量之比，一般為1

I：高低劑量之比的對數(shù)，即log2或log4。

求出Pr ： (5) Pr = Ar×θ 式中：

Pr：供試品實(shí)際單位數(shù)

Ar：供試品標(biāo)示量或估計單位

材料和儀器

（1）細(xì)菌：短小芽胞桿菌[CMCC（B）63202]的芽胞懸液。

（2）培養(yǎng)基：效價檢定用培養(yǎng)基（上層、底層）。

（3）抗生素：抗生素檢品及標(biāo)準(zhǔn)品（高劑量、低劑量，高劑量與低劑量之比為2:1）。

（4）試劑與器材：滅菌生理鹽水，無菌平皿，牛津杯，無菌吸管，鑷子，滴管，直尺。

實(shí)驗(yàn)方法

（1）取無菌平皿，加入20ml底層培養(yǎng)基，凝固后作為底層。

（2）用滅菌生理鹽水將短小芽胞桿菌的芽胞懸液稀釋至一定濃度以能得到清晰的抑菌圈，且標(biāo)準(zhǔn)品高濃度所得抑菌圈直徑在18~22mm為基準(zhǔn)。用無菌吸管吸取1ml芽胞懸液，加入到200ml恒溫于50℃的上層培養(yǎng)基中搖勻，迅速以無菌吸管吸取5ml，注入到底層培養(yǎng)基上，鋪平待凝。

（3）在平板底部四邊，分別對角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”標(biāo)記。

（4）鑷子火焰滅菌3次，然后夾取4個牛津杯垂直放置在平板中標(biāo)志附近（注：勿使鋼管陷入培養(yǎng)基內(nèi)，各小杯之間盡量等距）。

（5）以無菌滴管分別在每個牛津杯內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素溶液至滿但不溢出管外，且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置30分鐘。

（6）將平皿置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16~18 h，量取各抑菌圈直徑（SH、SL、UH、UL），以毫米為單位，誤差不超過0.1mm。

（7）計算抗生素效價

（8）查放線圖計算抗生素效價